Neutralización de la actividad letal del veneno de serpiente Bothrops atrox por suero hiperinmune de llama (Lama glama) / Neutralization of the lethal activity from Bothrops atrox venom by hyperimune llama serum (Lama glama)

RESUMEN Objetivos: Evaluar la capacidad del suero hiperinmune de llama (Lama glama) para neutralizar la letalidad del veneno de la serpiente Bothrops atrox en ratones de laboratorio. Materiales y métodos: Se calculó la dosis letal media (DL50) de un pool de venenos de serpientes de Bothrops atrox de Perú, y se midieron los títulos de anticuerpos por ensayo ELISA; así como la potencia de neutralización del suero inmune por el cálculo de la dosis efectiva media (DE50) durante el periodo de inmunización. Resultados: La DL50 del veneno fue de 3,96 µg/g, similar a otros trabajos realizados en Bothrops atrox en Perú. Los títulos de anticuerpos contra el veneno se incrementan rápidamente en la llama mostrando una rápida respuesta inmune; sin embargo, la capacidad de neutralización se incrementa más lentamente y requiere de varias dosis y refuerzos de las inmunizaciones alcanzado una DE50 de 3,30 µL/g ratón y una potencia de neutralización 3,6 mg/mL después de 15 inmunizaciones. Conclusiones: El suero hiperinmune de llama es capaz de neutralizar la letalidad del veneno de la serpiente Bothrops atrox de Perú en ratones de laboratorio.

ABSTRACT Objectives: To evaluate the capacity of the hyperimmune llama serum (Lama glama) to neutralize the lethal activity of Bothrops atrox venom in laboratory mice. Materials and methods: Mean lethal dose (LD50) was calculated from a Bothrops atrox venom sample pool from Peru. The antibody titers were measured by ELISA assay; and the immune serum neutralization potency was measured by calculating the mean effective dose (ED50) during the immunization period. Results: The venom's LD50 was 3.96 μg/g; similar to what was found in other studies about Bothrops atrox carried out in Peru. The titers of antibodies against the venom increased rapidly in the llama, demonstrating a fast immune response; however, the neutralization capacity increased slowly and required several doses and immunization reinforcements, obtaining a ED50 of 3.30 μL/g mouse and a neutralization potency of 3.6 mg/mL after 15 immunizations. Conclusions: The hyperimmune llama serum is able to neutralize the lethality of the Bothrops atrox venom from Peru in laboratory mice.

Plasma convaleciente para el tratamiento de pacientes con COVID-19 / Convalescent plasma for the treatment of patients with COVID-19

ANTECEDENTES: Los coronavirus son una familia de virus causantes de enfermedades respiratorias, digestivas y del sistema nervioso en humanos y animales. A fines de 2019, se identificó en la provincia de Wuhan, China una cepa de coronavirus nunca antes encontrada en humanos, la cual recibió el nombre de SARS-CoV-2. La infección por SARS-CoV-2 se ha extendido a más de 212 países y fue declarada como pandemia por la Organización Mundial de la Salud. En nuestro país, se ha reportado 220 749 casos y un total de 427 578 fallecidos. El uso de plasma convaleciente ha sido utilizado con éxito en el pasado para el control de enfermedades infecciosas, y su uso en pacientes con enfermedades infecciosas respiratorias como SARS e influenza severa, sugiere una reducción de mortalidad frente a placebo o ninguna terapia, siendo el efecto más pronunciado cuando se aplicó en forma precoz tras el inicio de síntomas. OBJETIVO: Describir la evidencia científica disponible sobre la eficacia y seguridad del uso de plasma convaleciente en pacientes con COVID-19. MÉTODO: Búsqueda electrónica de estudios publicados en idioma español o inglés en Medline (Pubmed), Biblioteca Cochrane, Google Scholar, base de datos de publicaciones sobre coronavirus de OMS y OPS, y medRxiv entre el 01 de diciembre de 2019 (mes donde se reportó los primeros casos de COVID-19 en China) hasta el 13 de junio de 2020. La calidad de los desenlaces fue evaluada mediante la metodología GRADE. RESULTADOS: Se identificó un ensayo clínico aleatorizado desarrollado en China y un estudio de cohortes con un grupo de control histórico emparejado mediante puntaje de propensión. Ambos estudios compararon desenlaces de eficacia y seguridad de la administración de plasma convaleciente, en comparación con tratamiento estándar en pacientes con diagnóstico confirmado de COVID-19 con cuadro clínico severo o condiciones que pusieran en riesgo su vida (ej. shock, falla multiorgánica o necesidad de ventilación mecánica). El ensayo clínico finalizó prematuramente por ausencia de casos debido a la contención de la pandemia en China, reclutando solo el 51.5% de la muestra prevista. Mejoría clínica: En comparación con terapia estándar, el tratamiento con plasma convaleciente redujo el tiempo hasta alcanzar mejoría clínica en pacientes con enfermedad severa (hazard ratio [HR]: 2,15; IC 95%: 1,07 a 4,32), sin diferencias en el grupo de pacientes con condiciones que pusieran en peligro la vida. No se observó diferencias en el porcentaje de pacientes que alcanzaron mejoría clínica a los 28 días para ninguno de los dos grupos. Mortalidad: Un ensayo clínico no observó diferencias significativas en el riesgo de muerte a los 28 días, entre pacientes tratados con plasma convaleciente o tratamiento estándar. Un estudio de cohortes observó una disminución del riesgo de muerte solo en pacientes no intubados tratados con plasma convaleciente (HR (log): -1,66; IC 95%: -3,0 a -0,06; p=0,015), sin diferencias en pacientes intubados. Alta hospitalaria: Un ensayo clínico no observó diferencias en el porcentaje de pacientes con alta hospitalaria a los 28 días entre los grupos tratados con plasma convaleciente o tratamiento estándar. Tasa de conversión de PCR viral: Un ensayo clínico observó que el plasma convaleciente incrementó significativamente la probabilidad de conversión negativa de PCR viral a las 72 horas, en comparación con un grupo control que recibió tratamiento estándar (OR: 11,39; IC 95%: 3,91 a 33,18). Requerimiento de oxigeno: Un estudio de cohortes observó que los pacientes tratados con plasma convaleciente tuvieron mayor probabilidad de disminuir la necesidad de requerimiento de oxígeno suplementario a los 14 días post-trasfusión, en comparación a un grupo control (OR: 0,86; IC 95%: 0,75 a 0,98). Eventos adversos: Solo un ensayo clínico reportó resultados sobre eventos adversos relacionados con la transfusión de plasma convaleciente. Dos pacientes (3.8%) presentaron este tipo de eventos, recuperándose completamente con medicación de soporte. CONCLUSIONES: El tratamiento con plasma convaleciente no incrementó el porcentaje de pacientes que alcanzaron mejoría clínica a los 28 días, en comparación con el tratamiento estándar. Sin embargo, en el subgrupo de pacientes menos graves, el tiempo para alcanzar mejoría clínica fue más corto. Asimismo, no se observó diferencias en la proporción de pacientes que lograron el alta hospitalaria a los 28 días. Los hallazgos de los estudios incluidos en la presente revisión, coinciden en no observar diferencias en la reducción de la mortalidad entre pacientes tratados con plasma convaleciente o tratamiento estándar. Sin embargo, un estudio observacional reportó una reducción significativa de la mortalidad en el subgrupo de pacientes no intubados (análisis no planificado). El uso de plasma convaleciente incrementó la proporción de pacientes con carga viral indetectable a las 72 horas y redujo la necesidad de oxígeno suplementario a los 14 días. Los eventos adversos relacionados con la transfusión de plasma convaleciente ocurrieron en un 3.8% de participantes (2/54) de un ensayo clínico, siendo estos eventos revertidos completamente mediante medicación. Los desenlaces evaluados fueron considerados como calidad de evidencia muy baja debido a presentar alto riesgo de sesgo, principalmente en relación a la falta de enmascaramiento, tamaño de muestra pequeño, tiempo de seguimiento corto, falta de potencia estadística para evaluar diferencias en algunos desenlaces, la heterogeneidad de las poblaciones de estudio, de la forma de administrar las intervenciones, y la probabilidad de factores de confusión residuales no debidamente ajustados.(AU)

Cepario autóctono de leptospiras en la prueba de micro - aglutinación / Micro - agglutination test of Autogenous leptospirosis

Introducción: leptospirosis. Zoonosis más frecuente en Cuba, como enfermedad infecto-contagiosa. Objetivos: identificar las cepas de leptospiras aisladas localmente, para ser empleadas en la prueba de microaglutinación. Apreciar su comportamiento serológico frente a las cepas de referencia. Método: estudio experimental, de sueros de pacientes presuntivos de padecer Leptospirosis, con 60 muestras, en el Instituto Carlos J. Finlay, de La Habana. Identificación de 40 sueros reactores a la hemaglutinación pasiva. Identificación de 34 cepas, de un total de 250 aislamientos, a partir de hemocultivos, de pacientes con antisueros policlonales a serogrupos y anticuerpos monoclonales a serovar. Se conformaron cinco cepasrepresentativas de los serovares: Ballum Ballum, Canicola Canicola, Pomona Pomona, Hebdomadis Wolffi e Icterohaemorrhagiae Copenhageni, como las de mayor circulación en la región. Se realizó la prueba de microaglutinación con las cepas aisladas localmente, y las de referencia de forma paralela.Resultados: mayor reactividad con las cepas locales, y conformación de cinco cepas representantes de los serovares: Ballum Ballum, Canicola Canicola, Pomona Pomona, Hebdomadis Wolffi e Icterohaemorrhagiae Copenhageni, como las de mayor circulación en la región. Se encontró una concordancia de 86,36 por ciento en la reactividad. Conclusiones: los resultados mostraron mayor reactividad con las cepas locales que con las de referencia, elevada concordancia e incremento de los títulos de anticuerpos de los sueros reactores usando cepas locales, y disminución del promedio de las reacciones cruzadas cuando se utilizaron las cepas locales. Se demostró su utilidad en la evaluación de estudios inmunológicos.(AU)

Introduction: leptospirosis, a contagious infectious disease considered the most common zoonosis in Cuba. Objectives: to identify locally isolated leptospirosis strains for micro- agglutination test. To evaluate their serological behavior against the reference strains.Method: an experimental study of 60 presumptive Leptospirosis patients serum samples. Forty sera reactive to passive hemagglutination. To isolate 250 blood cultures of patients. To show 34 strains identified at the Carlos J. Finlay Institute, with polyclonal antisera to serogroups and monoclonal antibodies to serovar. Five strains represented by the serovars: Ballum Ballum, Canicola Canicola, Pomona Pomona, Hebdomadis Wolffi and Icterohaemorrhagiae Copenhageni, were the most circulating strains in the region. The microagglutination test was performed in parallel form to locally isolated strains and reference strainsResults: greater reactivity with the local strains. Five strains representing the serovars: Ballum Ballum, Canicola Canicola, Pomona Pomona, Hebdomadis Wolffi and Icterohaemorrhagiae copenhageni as the most circulating in the region. The reactivity showed 86.36 percent concordance. Conclusions: there was greater reactivity with the local strains than the reference strains. A higher concordance increased the titers of antibodies of the reactive sera, by the use of local strains. The average of cross reactions decreased when the local strains were used. The evaluation of immunological studies was demonstrated.(AU)

Búsqueda de flavivirus en individuos con sospecha clínica de dengue y resultado negativo para el antígeno NS1 en Paraguay / Search of flavivirus in individuals with clinical suspicion of dengue and negative for the NS1 antigen in Paraguay

Los flavivirus son responsables de una considerable morbi-mortalidad a nivel mundial. Entre ellos, el virus del dengue (DENV) es causante de graves problemas de salud pública en Paraguay. El objetivo del estudio fue detectar infecciones por flavivirus a través de una reacción de RT-nested PCR genérica para flavivirus en 195 muestras de individuos con sospecha de dengue, negativos por el test inmunocromatográfico (antígeno NS1 ­ DENV), provenientes del área metropolitana de Asunción entre 2011 y 2013. Las muestras positivas para flavivirus fueron sometidas a dos reacciones de RT-nested PCRs específicas para DENV. El límite de detección (LD) para flavivirus fue de 0,2 UFP/reacción. En total 43/195 muestras fueron positivas para flavivirus. De estas, 38/43 (88,4%) correspondieron a DENV (6 DENV-1, 30 DENV-2 y 2 DENV-3). Además, 5/43 casos (11,6%) positivos para flavivirus fueron negativos para DENV por ambas reacciones específicas, pudiendo deberse a infecciones por otros flavivirus. Los resultados sugieren que la utilización de una reacción genérica seguida de otras reacciones específicas para DENV en casos febriles negativos para NS1 por el método inmunocromatográfico permitiría detectar más casos de infecciones por DENV y además, podría contribuir a la identificación de casos debido a infecciones por otros flavivirus.

Flaviviruses are responsible for considerable worldwide morbidity and mortality. Among them, the dengue virus (DENV) causes serious public health problems in Paraguay. The objective of the study was to detect flavivirus infections using a generic RT-nested -PCR in 195 samples of individuals with suspected dengue and negative for the inmunochromatographic test (NS1 antigen ­ DENV), from the metropolitan area of Asuncion between 2011 and 2013. The flavivirus-positive samples were subjected to two reactions of DENV-specific RT-nested PCRs. The detection limit (DL) for flavivirus was 0.2 PFU / reaction. In total, 43/195 samples were positive for flavivirus. Of them, 38/43 (88,4%) corresponded to DENV (6 DENV-1, 30 DENV-2 and 2 DENV-3). In addition, 5/43 cases (11.6%) positive for flavivirus were negative for DENV by both specific reactions, and may be infections caused by other flaviviruses. The results suggest that the use of a generic reaction followed by other DENV specific reactions in febrile negative cases for NS1 by the immunochromatographic method would allow the detection of more cases of DENV infections and could contribute to the identification of cases due to infections by others flaviviruses.

Estudios sobre la brucelosis y la leptospirosis canina y humana en Bogotá, D. C / Studies on brucellosis and leptospirosis, canine and human Bogota, D C

Con el objeto de obtener información acerca de la leptospirosis y la brucelosis en caninos y humanos del Distrito Capital, se desarrolló un estudio epidemiológico transversal (cross sectional) aplicando un formato de encuesta estructurada. El estudio incluyó 625 predios, en los que se encuestaron y muestrearon serológicamente 1.307 personas y 795 caninos. Se generó con las muestras un banco de sueros. En dichos sueros se determinó la prevalencia serológica para B. canis y B. abortus en caninos y humanos (seroprevalencia combinada de 10,4% y 0,4%, respectivamente). Para determinar la seroprevalencia de la leptospirosis se utilizó una batería de antígenos compuesta por ocho serovares: Australis, Autumnalis, Bratislava, Canicola, Copenhageni, Hardjoprajitno, Icterohaemorrhagiae y Pomona; la seroprevalencia combinada en caninos fue de 73,6%. La información serológica se relacionó estadísticamente con la obtenida mediante las encuestas para determinar posibles factores de riesgo; de esta manera se determinaron como posibles factores de riesgo para B. canis en caninos la cercanía a lotes baldíos y para humanos la presencia de terraza en el predio, mientras que para B. abortus no se obtuvieron asociaciones que permitieran determinar factores de riego. En lo relacionado con leptospirosis canina se determinaron asociaciones dependiendo del serovar. A partir de los hallazgos obtenidos se propone un modelo preliminar para la vigilancia epidemiológica de estas enfermedades, cuyo desarrollo e implementación dependerá de la Secretaría de Salud de Bogotá, Distrito Capital.

In order to obtain information regarding Leptospirosis and Brucellosis present in dogs and humans in the Capital District, we developed a cross-sectional study, applying a structured survey format. The study included 625 households in which we took samples of blood serum from 1307 persons and 795 canines were taken. In these samples we determined the serological prevalence for B. canis and B. abortus in canines and humans (combined seroprevalence of 10.4% and 0.4% respectively). To determine the seroprevalence of Leptospirosis, a group of antigens consisting of eight serovars: Australis, Autumnalis, Bratislava, Canicola, Copenhageni, Hardjoprajitno, Icterohaemorrhagiae and Pomona was used. The combined seroprevalence in canines was 73.6%. This serological information was compared statistically with that obtained from other surveys to identify possible risk factors. In this way, the proximity of vacant lots was identified as a possible risk factor for B. canis in canines and for humans, the presence of open terraces in the house. As for B. abortus no associations were obtained which could be considered risk factors. With regards to canine Leptospirosis different associations were obtained, depending on the serovar. Based on the obtained results, a preliminary model is proposed for the surveillance of these diseases, and its development and implementation will depend on the Health Secretary of Bogotá DC.

Purificación de IgG1, IgG2 e IgG3 mediante cromatografía de afinidad a partir de intacglobín / Purification of IgG1, IgG2 and IgG3 by affinity chromatography starting from Intacglobin

Se describe un método de purificación de las subclases IgG1, IgG2 e IgG3 a partir de Intacglobin mediante cromatografía de afinidad con el empleo de proteína A Sepharose y la aplicación de un gradiente lineal de pH. Se detectó la presencia de IgG1, IgG2 e IgG3 en las fracciones eluidas mediante doble inmunodifusión e inmunoelectroforesis, utilizando sueros comerciales anti IgG, anti IgG1, anti IgG2 y anti IgG3. El procedimiento desarrollado se caracterizó por su sencillez, elevada resolución y la relativa pureza de las subclases aisladas. Se logró un rendimiento total del 53,7 %, lo que indica la eficiencia del método.

A method for the purification of IgG1, IgG2, and IgG3 subclasses starting from Intacglobin by affinity chromatography with the use of protein A Sepharose and the application of a lineal gradient of pH is described. IgG1, IgG2 and IgG3 were detected in the eluted fractions by doble immunodifussion and immunoelectrophoresis by using anti IgG, anti IgG1, anti IgG2 and anti IgG3 commercial sera. The procedure developed was characterized by its simplicity, high resolution and the relative purity of the isolated subclasses. A total yield of 53.7 % was attained, which demonstrates the efficiency of this method.